核(he)心提示：HPLC系統內(nei)部(bu)可能(neng)的(de)污染物來自人的(de)觸摸，暴露在實(shi)驗室化學環境，與零部(bu)件制造相關的(de)殘(can)留物，或來自先前的(de)流動相和(he)樣品的(de)殘(can)余(yu)物。

HPLC系(xi)(xi)統(tong)內部(bu)可能的(de)污(wu)染(ran)物來(lai)自人的(de)觸摸，暴露在實(shi)驗室化(hua)學環(huan)境，與零部(bu)件制造相關的(de)殘留物，或來(lai)自先前的(de)流(liu)動相和樣品的(de)殘余物。雖然HPLC系(xi)(xi)統(tong)自身也會(hui)逐步地被流(liu)動相清(qing)洗，但某些釋放出的(de)雜質會(hui)吸附在色(se)譜(pu)柱上以及檢測器(qi)潤(run)濕的(de)表面(mian)上，因而會(hui)降低總的(de)性能。

•磷酸清洗：通常用(yong)于從系統(tong)中除(chu)去有機雜(za)質。可能(neng)是由于洗滌作用(yong)，它似乎比(bi)強(qiang)有機溶劑更(geng)好也更(geng)快。這一(yi)步(bu)清(qing)洗必須在硝酸鈍化(hua)之前(qian)完成。

•硝酸鈍化：實際上(shang)是(shi)作用于不銹鋼表(biao)面(mian)，在表(biao)面(mian)上(shang)生成均(jun)勻的氧(yang)化(hua)層(ceng)。這(zhe)層(ceng)氧(yang)化(hua)膜保護不銹鋼免受腐蝕(鹵化(hua)物，螯合劑(ji)，等等)并且盡量減少浸出(chu)的金屬離(li)子進入流動相(xiang)。

以下應用需要在(zai)使用前做磷酸(suan)(suan)清洗(xi)和硝酸(suan)(suan)鈍化，包括(kuo)：

•所有(you)的氨基酸分析系統；

•所有包含電化學檢測器(qi)的(de)系統；

•所有要分(fen)析(xi)無機(ji)陽(yang)離(li)子，包(bao)括(kuo)過渡(du)金屬的系統；

•所有(you)利用(yong)柱(zhu)后添加(jia)衍生(sheng)試劑(ji)或絡合樣品組分的系統。

以下應用需要在使(shi)用前只做磷酸(suan)清洗，包括：

•所有常(chang)規用(yong)途(tu)的、可(ke)能在低pH環境下(xia)在低紫外檢測波(bo)長(chang)下(xia)運(yun)行的HPLC系(xi)統；

•所(suo)有(you)需(xu)要(yao)高靈(ling)敏(min)度(du)性能的梯度(du)紫外檢測系統。

一.準(zhun)備(bei)工作

首(shou)先(xian)，摘下(xia)色譜(pu)柱，用(yong)兩通或(huo)接(jie)頭(tou)取代色譜(pu)柱。在(zai)實(shi)行這一(yi)清洗步驟時，如果有可能(neng)(neng)選擇(ze)監(jian)測(ce)(ce)的紫(zi)外波長為：254nm。通過軟件或(huo)移(yi)去(qu)電纜的方式取消紫(zi)外檢測(ce)(ce)器的自動回零功(gong)能(neng)(neng)。

二.具體步驟

1、用甲醇*沖洗系統，以等比例(li)方式通過泵的所有管路。

2、用(yong)水*沖(chong)洗系統，以等比例方式通過泵的所有(you)管路。

3、以(yi)等(deng)(deng)比(bi)(bi)例方式通過(guo)泵的所(suo)有(you)管路導入～30%v/v磷(lin)酸水溶液。以(yi)1mL/min流速洗大約一個(ge)小時。在沖洗期間(jian)活動所(suo)有(you)的閥，包(bao)括(kuo)：參比(bi)(bi)閥、進樣閥及旁路閥等(deng)(deng)等(deng)(deng)。

4.用水*沖(chong)洗所有管路(lu)和系統。

必要(yao)時用6N硝酸(HN03)重復(fu)以上步(bu)驟。否則，跳到第7步(bu)。注意：硝酸是一個強紫外吸收溶液。除非絕對需要(yao)，不(bu)要(yao)做(zuo)鈍化程序。

5.以等比例方式通過(guo)泵的所有管路導人6N硝酸水溶液(大(da)約是40%)。以1mL/min流速(su)洗大(da)約一(yi)個(ge)小時。

6.用水*沖洗(xi)系統，仔細檢(jian)查是否有(you)任何滲漏，在沖洗(xi)期間反復活(huo)動(dong)所(suo)有(you)的閥，包(bao)括(kuo)：參比閥、進樣(yang)閥及旁(pang)路閥等等。

注(zhu)意：如(ru)果你要用低(di)于270nm的紫外(wai)波(bo)長作(zuo)檢測，則需(xu)要更(geng)大量(liang)水(shui)的清洗(xi)過程，不斷的換(huan)新鮮(xian)水(shui)并活動各個(ge)閥(沖洗(xi)進樣器，等)以(yi)便從系統(tong)中除(chu)(chu)去所有(you)的痕量(liang)硝酸根離(li)子(zi)。硝酸清洗(xi)后經常在(zai)幾(ji)天之內都會(hui)觀察(cha)到在(zai)低(di)紫外(wai)波(bo)長下有(you)負的基線漂移。勤換(huan)水(shui)和有(you)耐心是(shi)盡快消除(chu)(chu)紫外(wai)本底(di)的關鍵。

7.返(fan)回到甲醇洗(xi)，然(ran)后(hou)繼(ji)續用實(shi)驗所需的溶劑(ji)沖洗(xi)。

8.通過軟(ruan)件或接上電纜的(de)方式(shi)重(zhong)新(xin)使紫外檢測器的(de)自動回(hui)零功能恢復。